在骨组织研究中，多重免疫荧光（mIHC）技术因其高维度分析能力备受青睐，但骨样本的特殊性（如钙化结构、抗原易损性、切片易脱落等）常导致实验失败。慧蓝生物通过多年技术积累，开发了针对骨组织的全流程解决方案。以下结合真实案例，解析常见问题及应对策略。

​案例一：骨肿瘤样本抗体洗脱不彻底导致串色​

​问题描述​
在骨肉瘤样本中尝试同时标记CD68（巨噬细胞）、TRAP（破骨细胞）和Ki-67（增殖标志物）。实验中发现CD68与TRAP信号严重串色，导致结果无法区分。
​原因分析​
骨组织因钙化结构致密，传统洗脱方式（如热修复法）渗透性不足，残留抗体结合位点引发非特异性信号。
​慧蓝解决方案​

1. ​洗脱液优化​：采用适量37度预热至完全溶解的慧蓝生物抗体洗脱液（货号：RC-010）37度放置5-20分钟，弃去洗脱液，再次滴加适量抗体洗脱液覆盖样本37度放置5-20分钟，弃洗脱液，PBS洗三次，每次5分钟抗体洗脱液+EDTA 或柠檬酸 60℃预加热后处理30分钟。若抗体结合强，可抗体洗脱液和EDTA9.0抗原修复液（20X）（货号：RC04）或柠檬酸抗原修复液（20X）（货号：RC03）60℃30min热修复法搭配使用。
2. ​分步洗脱策略​：优先洗脱低亲和力抗体（如Ki-67），后处理高亲和力抗体（如TRAP）。
    

​案例二：硝酸脱钙导致骨转移瘤抗原破坏​

​问题描述​
某研究团队对骨转移性前列腺癌样本进行硝酸脱钙液（10%）脱钙后做PSA（前列腺特异性抗原）和CD31（血管标志物）双标，发现PSA信号完全丢失。
​原因分析​
传统硝酸脱钙液（10%）虽脱钙速度快，但强酸性导致PSA抗原表位不可逆破坏。
​慧蓝解决方案​。

1. ​更换脱钙方式​：硝酸作为强酸会破坏抗原和细胞核，建议以 EDTA 碱性脱钙液，适当在 37℃加热缩短脱钙时间。

​案例三：骨切片多次洗脱后脱片​

​问题描述​
某科研院所在小鼠骨质疏松模型中尝试5色标记（Osterix、TRAP、CD206、iNOS、DAPI），第3轮洗脱后50%切片脱落。
​原因分析​
骨组织切片经多次高温修复（pH 9.0 Tris-EDTA）后，胶原纤维结构松散，耐受性下降。
​慧蓝解决方案​。

1. ​防脱片处理​：可以适当降低修复强度，用相对比较温和的柠酸抗原修复液，如果在多重免疫荧光抗体洗脱时脱片，可以使用我司mlHc专用的抗体洗脱液（货号：RC-010）
    

​慧蓝生物骨组织mIHC全流程解决方案​

针对骨组织多重免疫荧光（mIHC）实验的复杂性，慧蓝生物整合了脱钙液、洗脱液、试剂盒、抗体、成像与分析体系六大核心模块，提供从样本处理到数据解析的一站式解决方案。以下为技术要点解析：

​一、靶向脱钙技术​：慧蓝生物EDTA脱钙液（货号RC04）：替代硝酸脱钙，保护抗原完整性，尤其适用于骨转移瘤等脆弱样本。

二、智能洗脱体系​：慧蓝生物mlHc专用抗体洗脱液（货号：RC-010），洗脱抗体的同时避免骨组织脱片。

三、多重免疫荧光试剂盒：骨组织优化的TSA技术​

慧蓝生物多重免疫荧光试剂盒，配套齐全，灵敏度高、稳定性强、性价比超高。并针对钙化组织特点优化实验流程

• 温和修复体系​：推荐EDTA9.0抗原修复液（20X）（货号：RC04）或柠檬酸抗原修复液（20X）（货号：RC03）60~80℃水浴20~40min，降低高温对骨组织切片的结构损伤。​
• 分步洗脱策略​：优先洗脱低亲和力抗体，高亲和力抗体采用延长洗脱时间（37℃×20分钟）或者抗体洗脱液和EDTA9.0抗原修复液（20X）（货号：RC04）或柠檬酸抗原修复液（20X）（货号：RC03）60℃30min热修复法搭配使用。

四、多重免疫荧光抗体：骨微环境精准标记​

慧蓝生物提供骨组织特异性抗体库，覆盖骨细胞、免疫细胞及微环境标志物：

1. ​核心抗体推荐​：

   • ​破骨细胞​：TRAP（货号：ABB8271）、CD68（货号：HL18057）
   • ​成骨细胞​：RUNX2（货号：HL18347）
   • ​免疫细胞​：CD4（货号：HL18419）、CD8（货号：HL18067）、CD206（货号：ABB00004，M2巨噬细胞）、iNOS（货号：ABB5993，M1巨噬细胞）
   • ​血管与基质​：CD31（货号：HL18207，血管内皮）、Vimentin（货号：ABB5134，间质细胞）

2. ​抗体验证​：

   • 所有抗体均通过骨组织石蜡切片、冰冻切片及脱钙样本的交叉验证，确保特异性。

五、成像体系：高分辨率多通道荧光显微镜​

慧蓝生物五标六色多通道荧光显微镜（货号：HL-NE610-56）​：

​硬件优势​：

• ​六通道滤光片​：适配TYR系列染料（DAPI、TYR-520、TYR-570等），避免光谱交叉。
• ​LED冷光源​：减少光漂白，支持长时间连续拍摄，尤其适用于骨组织厚切片。
• ​apo消色差物镜​：消除钙化区域折射率差异导致的成像模糊。

慧蓝生物HuilanBio扫描仪（货号：HL-Scanner）

采用最先进的光学和电子技术，确保每一次扫描都能捕捉到最细微的细节。无论是白光成像还是多色荧光检测，我们的扫描仪都能提供出色的分辨率和灵敏度，使您的研究数据更加精确和可靠。

设备支持明场和荧光双模态成像，多达7个荧光通道支持定制化配置，适配各种实验需要， 可根据需要灵活切换，帮助科研人员精准获取组织切片的图像数据。

1. 物镜选择：配备UPlanApo物镜，支持10X、20X、40X等多种倍率选择，能够从宏观到微观全方位观察组织样本。
2. 高分辨率成像：配备高性能的双1/1.2" 2.3MP CMOS相机，像素尺寸≥5.86 μm × 5.86 μm，能够精确还原每个细胞的细节。

3. 定制化配置：多达7个荧光通道支持定制化配置，适配各种实验需要，帮助科研人员高效完成复杂的成像任务。

六、分析体系：AI驱动的定量与空间解析​

慧蓝生物Huilan AI分析软件（货号：HL-FX）实现数据深度挖掘：

1. ​单细胞定量​：

   • 识别骨组织中DAPI标记的细胞核，通过荧光强度阈值自动划分阳性细胞。
   • 支持多指标共表达分析（如CD68+CD206+ M2巨噬细胞）。

2. ​空间分析​：

   • ​距离分析​：计算破骨细胞（TRAP+）与血管（CD31+）的空间分布关系，揭示骨重塑机制。
   • ​组织分区​：自动划分骨坏死区、交界区与正常骨组织，统计不同区域免疫细胞浸润密度。

3. ​数据可视化​：

   • 一键生成热图，展示标记物表达相关性；支持多通道图像伪彩合成。

​方案价值与技术支持​

慧蓝生物解决方案已成功应用于骨肿瘤微环境解析、骨质疏松机制研究等领域。​

若您的骨组织研究面临类似挑战，欢迎联系慧蓝生物技术团队，添加客服微信（微信号：huilanbio01），免费为您提供“1v1方案定制咨询”

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