大家好！今天我们来聊聊大家在多重免疫荧光实验中常遇到的一个问题：要做TSA多重免疫荧光，细胞爬片、冰冻切片和石蜡切片，到底该选哪种？
选对了能让你的实验事半功倍！先说结论，石蜡切片结合TSA技术“YYDS”，能实现10重甚至更多重的标记。
先来认识一下三位“主角”
细胞爬片就像是让细胞在玻片上“安家落户”。前处理过程包括细胞准备、固定、通透，相对简单快捷。但它通常只适合三标以下的标记。
冰冻切片则是把新鲜组织快速冷冻后，用OCT包埋剂包埋并在冰冻切片机上切片。但它也建议只做三标以下的标记。
石蜡切片是最常规的组织学制片技术，包括取材、固定、洗涤和脱水、透明、浸蜡、包埋、切片与粘片等步骤。整个过程需要数日，但标本可以长期保存使用。更重要的是，它特别适合TSA技术，能够实现10重甚至更多重的标记。
为什么强烈推荐石蜡切片做多重荧光？
为了让大家一目了然，我准备了一个对比表格：
石蜡切片/冰冻切片/细胞爬片多重免疫荧光染色操作流程有什么不同？
破膜/抗原修复方式/抗体洗脱方式怎么选择？
TSA技术：石蜡切片实现10+标的“神器
TSA技术是一种利用HRP对靶抗原进行高密度原位标记的酶学检测方法。它最大的优势是能极大增强信号，特别适合检测那些表达量低的靶标。
对于石蜡切片，TSA技术简直是“神器”！
TSA技术带来的优势包括：
- 信号几何级放大：能提供极强的敏感度，检测极微量的目的抗原，尤其适合低丰度靶标的检测。
- 节省抗体：实测可以显著提升抗体的稀释比例，可降低抗体成本。
- 克服种属限制：由于每轮孵育后可通过微波处理洗掉非共价结合的抗体，只留下共价结合的荧光素，因此无需担心抗体交叉反应及一抗二抗种属匹配问题。
- 实现更多重标记：上述特性使得TSA技术特别适合在石蜡切片上进行10+标以上的多重荧光标记。
怎么选择最适合你的样本类型？
选择细胞爬片当：
- 您的研究聚焦于细胞水平，需要清晰的细胞形态
- 标记指标数量有限（≤3个）
选择冰冻切片当：
- 关注的抗原对有机溶剂敏感
- 标记指标数量有限（≤3个）
选择石蜡切片当：
- 您希望进行高度多重标记（＞3个，甚至10+标）
- 样本需要长期保存
- 对组织结构清晰度要求高
细胞爬片、冰冻切片和石蜡切片各有各的优缺点，没有绝对的“最好”，只有“最合适”。细胞爬片和冰冻切片适合三标以下的标记，而石蜡切片结合TSA技术后，能实现10+标的多重标记，成为深入探索生命复杂机制的利器。
希望这篇文章能帮你理清思路，选择最适合自己实验的样本类型。如果你还有更多问题，欢迎随时联系我们上海慧蓝生物的技术支持团队！
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