掌握这些技巧，让细胞爬片成为你的科研利器

细胞爬片是免疫荧光、原位杂交、凋亡检测等实验的重要基础技术。一张高质量的细胞爬片，是获得精美实验图片和可靠数据的关键。今天，我们就来详细解析细胞爬片的制备流程，帮助你快速掌握这一核心技术。

一、什么是细胞爬片？

细胞爬片是一种将细胞培养在玻璃或塑料表面的技术，让细胞在玻片上附着并扩展。这种技术可以用于观察细胞形态、运动及细胞间相互作用，是多种细胞实验的基础。

二、爬片的前期准备

1. 爬片的选择与裁剪

可根据实验需求选择专用细胞爬片或普通盖玻片，放入相应的培养板（如6孔板、12孔板、24孔板）。

​常用爬片尺寸与孔板配套参考​：

• 直径12mm → 24孔板

• 直径18mm → 12孔板

• 直径22mm → 6孔板

2. 爬片的清洁与灭菌

清洁是影响细胞贴壁效果的关键步骤：将爬片置于浓硫酸或5%稀盐酸中浸泡过夜→次日用自来水冲洗20次→无水乙醇浸泡 30 min，随后 70 % 乙醇保存备用，使用前 100 % 乙醇 1 min 再紫外照射 10 min 。

灭菌处理可采用以下方法：​火焰法​（少量爬片）：用金属镊子夹住爬片在70%乙醇中浸泡后，在火焰上烤干；高压灭菌​（数量较多）：将爬片放入专用金属支架上高压消毒；干热灭菌​（大量爬片）：放在耐热容器中，干烤2小时。

三、细胞爬片制备流程

1. 铺片

在孔板底部中央加约20μL培养基或PBS作为粘附液，用无菌镊子夹取爬片边缘，平置于液滴上，轻压排除气泡，使爬片与板底充分接触。这一步骤利用液体表面张力使爬片与培养皿粘合，可防止加入细胞悬液时爬片漂浮，避免形成双层细胞贴附。

2. 细胞接种

消化细胞并计数，用完全培养基重悬细胞，调整至合适密度（通常1×10⁶/ml～2×10⁶/ml）。

​接种技巧​：将细胞悬液严格滴加于爬片表面，控制加液量使液体覆盖整个爬片但不溢出边缘，可防止“细胞生长边集效应”（边缘区域细胞密度高于中央的现象）。

3. 细胞培养

将接种好的细胞放入37℃、5% CO₂培养箱中常规培养。细胞贴壁所需时间通常为4小时至24小时。若细胞数目有限，可把细胞悬液直接滴在玻片上，静置4小时后再轻轻加入培养液。

四、细胞爬片的固定处理

1. 固定液选择

​4%多聚甲醛​：适用于免疫荧光、TUNEL染色等，室温固定15-30分钟；冷丙酮​：适用于一般免疫组化染色，-20℃固定10分钟；95%乙醇​：可用于免疫组化，室温固定15分钟；4%中性甲醛（10%中性福尔马林）​​：应用广泛，室温固定15-30分钟。

吸弃原有培养基后，使用预温的PBS轻柔漂洗细胞2次，以去除残留的血清蛋白及死细胞。随后，加入4%多聚甲醛，于室温固定15分钟。

2. 固定后处理

固定完成后，PBS清洗爬片3次，每次3分钟，PBS清洗后进行后续实验。

慧蓝生物可承接细胞爬片的TSA、鬼笔环肽、Edu（488/555/647）、Tunel（白光/cy3/488）等检测服务

保存运输方式：制备细胞爬片后用4%的多聚甲醛固定15min后泡PBS中， 4℃送样。

五、常见问题与解决方案

​​问题1：细胞贴壁不良

解决方案：使用包被液（多聚赖氨酸、明胶、鼠尾胶原等）预处理爬片，增强细胞贴附。

​问题2：爬片漂浮​

解决方案：铺片时确保加入适量粘附液，并充分排除气泡。

​问题3：细胞分布不均​

解决方案：接种时确保细胞悬液均匀滴加在爬片表面，避免直接冲在爬片边缘。

​问题4：细胞密度不当​

解决方案：接种前准确计数，根据实验需求调整合适密度。通常密度宜低不宜高，避免细胞过度密集。

六、小贴士

1. ​全程无菌操作​：所有操作应在超净工作台内进行，器材消毒，避免微生物污染。

2. ​荧光实验避光​：如果细胞带有荧光标记，所有操作步骤尽量在较暗处进行。

3. ​固定时间控制​：固定时间不宜过长，以免影响抗原活性。

4. ​保存时间​：固定后的爬片建议尽快使用。

5. 需要取出取片时，可将注射器针头尖端弯曲成小钩，轻轻挑起爬片，再用小镊子取出。注意夹取爬片边缘，避免夹破爬片或造成划痕。

【慧蓝生物制备细胞爬片后鬼笔环肽染色示例图】

如有任何疑问，请随时通过以下方式联系我们的客服团队：

技术支持：  13026142229； 18371210073

销售&售后：19101712317；13026142229

服务热线 ： 021-58153560

慧蓝生物公众号： 慧蓝生物客服微信：

**慧蓝生物，不止于服务**