原理介绍: 

酪酰胺信号放大(TSA ，Tyramide signal amplification)技术是一类利用辣根过氧化酶（HRP）对靶 蛋白进行标记的酶学检测方法，类似常规免疫组化的 DAB 显色方法  ，TSA 技术同样采用 HRP 标记的二 抗，同样有对应的“显色 ”步骤（HRP 催化加入反应体系的酪胺荧光素底物，产生活化荧光底物，活化底 物可与抗原上的酪氨酸等残基共价结合，使样品上稳定的共价结合酪胺荧光素。之后用热修复法或者抗体洗脱液洗去非共价结合的一抗-二抗-HRP 复合物，重复下一种一抗-hrp 二抗来第二轮孵育，换另一种酪胺荧 光素底物，如此往复就可实现多重标记。 TSA 详细原理是利用酪胺 Tyramide 的过氧化物酶反应(酪胺盐在 HRP 催化 H202 下形成共价键结合位 点) ，产生大量的酶促产物，该产物能与周围的蛋白残基(包括色氨酸、组氨酸和酪氨酸残基)结合，这样在 抗原-抗体结合部位就有大量的荧光素沉积，结果使其检测信号得到 10- 100 倍增强。简单来说，用这种方法 做多重免疫荧光是利用二抗上带有的 HRP（而不是直接偶联荧光素），来催化后续添加入体系的非活性荧 光素。荧光素在 HRP 和过氧化氢的作用下被活化，跟临近蛋白的酪氨酸残基共价偶联，使得蛋白样品与荧 光素稳定结合。然后微波或煮沸或者水浴等热修复处理，前一轮非共价结合的抗体被洗掉，共价结合的荧 光素稳定共价结合在样本切片蛋白上。再换个一抗来第二轮孵育，周而复始。等到所有抗体孵育结束，荧 光素都结合好后，最后去检测结果。 由于每次体系中都只有单一抗体孵育，因此无需担心抗体交叉反应， 以及一抗二抗种属匹配问题，大大减少了实验设计时不同种属抗体选择匹配的限制。也就是说，如果用 TSA 技术，同一张片子上所有的靶标都可以选用特异性高的兔单克隆抗体。搭配同一支抗兔的 HRP 二抗就可以 进行实验，而且信号放大的倍数大大增强。本公司开发的试剂盒具体酪胺荧光染料为以下其中一种或者多 种：TYR-480，TYR-520，TYR-570，TYR-620，TYR-690，TYR-780。此试剂盒中的荧光染料可单独或配合使用。可以实现单标、双标、三标以及更多重荧光放大/多重同源抗体荧光标记等功能，极大丰富了此试剂盒的内涵。

试剂盒组分：

*染料使用方法：TSA 荧光染料反应液 =TYR-xxxPlus  荧光染料+TSA buffer；TYR-xxxPlus荧光染料：TSA buffer=1：200；TYR-xxxPlus  荧光染料与 TSA buffer 的稀释比例可以根据具体情况灵活调整优化，最佳范围为 1:50-- 1:400(1:200 大部分情况能得到最佳结果）；一般建议若一抗孵育时间常温 1h-3h 内，建议稀释比例 1:50- 1:200,  若一抗孵育时间 4 度过夜（12h 或以上），建议稀释比例 1:200- 1:400 或更高。

试剂盒使用简要流程：（详细操作步骤请参见技术文档——多重免疫荧光实验流程）