产品名称 |
鬼笔环肽(594-红色) |
存储方式 |
-20℃避光保存 |
使用方法 |
1.培养好的细胞爬片,轻轻吸去培养液,PBS缓冲液清洗细胞3次;2.4%多聚甲醛固定液室温固定15-30 min;注意:甲醇能破坏肌动蛋白,因此固定液中不得含有甲醇,避免使用含甲醇的甲醛溶液;3.PBS清洗细胞3次,每次5 min;4.滴加含0.1% Triton X-100 的PBS覆盖细胞,室温透化细胞20 min;5.PBS清洗细胞3次,每次5 min;6.用组化笔画在爬片周围画圈。取适量现配的鬼笔环肽染色工作液(1xPBS按1:50-1:200的比例稀释)完全覆盖细胞,室温避光孵育30-120 min。注意:染色体积可根据样本情况进行调节。孵育过程中为避免染液挥发,可将盖玻片放于密封容器内,此外,鬼笔环肽染色工作液中加入1% BSA可有效降低背景;7.PBS清洗细胞3次,每次5 min;8.向爬片上滴加即用型DAPI染色液覆盖细胞,室温染核5-10 min;PBS清洗细胞3次,每次1min(选做);9.滴加抗荧光淬灭封片剂封片;10.荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察结果,选择594通道(Ex/Em=593/614nm)和DAPI(Ex/Em=364/454 nm)通道观察染色结果并成像。 |
有效期 |
12个月 |
注意事项 |
1、使用前需完全解冻并离心。
2、若出现染色效果不佳时,可以采用含1%BSA的PBS预孵育30min,或者用含1%BSA的PBS代替1xPBS来配置鬼笔环肽工作液。
3、鬼笔环肽通常不具有细胞通透性,极少用于活细胞染色。
4、荧光染料都存在淬灭的问题,建议染色后尽快成像。
5、鬼笔环肽也可用于染色固定的冰冻组织切片,不推荐染色石蜡组织切片。
6、鬼笔环肽工作液按使用量配置,现配现用。
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鬼笔环肽是从致命的伞形毒蕈蘑菇中分离出来的一种毒素,可特异性结合于F-肌动蛋白的双环肽。因此用荧光染料标记的鬼笔环肽可以非常方便地研究F-肌动蛋白的分布。鬼笔环肽可在纳摩尔水平染色F-肌动蛋白。在各种植物细胞或动物细胞中,标记的鬼笔环肽对大、小细丝具有相似的亲和力,平均每个肌动蛋白亚基结合一个鬼笔环肽分子。不同于抗体,鬼笔环肽与肌动蛋白的结合亲和力在不同物种间没有显著变化。
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