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ROS检测(DHE探针)

  • 货号:HL-C-02
  • 100T¥500
产品名称 ROS检测(DHE探针)
存储方式 -20℃保存
使用方法 1、染色方法:1)探针溶液可在新鲜培养液、缓冲盐溶液或组织灌流液 中稀释到所需浓度,以此染色液更换细胞培养液或灌流液; 也可直接向细胞孵育液或灌流液中加入探针至所需浓度。2)依据细胞ROS含量的不同,DHE终浓度可选择在1 μM-100 μM的范围,孵育时间可选择10-90 min。孵育可在 37℃或室温进行,要求避光。 3)孵育结束后,用新鲜溶液清洗细胞或组织。2、荧光显微照相操作方法: 1)对贴壁生长细胞或活组织,可直接在荧光显微镜下观 察;对悬浮生长细胞,取25-50 μL细胞悬液滴到一张显微载 玻片上,再盖上一张盖玻片。 2)荧光显微镜下,用蓝光或绿光激发,观察和拍摄细胞 红色发射图像,ROS阳性细胞在整个核区被染成红色;用紫 外光激发时,胞浆中未氧化的DHE可发出蓝色荧光。 3、流式细胞分析操作方法: 1)对贴壁生长细胞,用胰酶消化制备成单细胞悬液;对悬浮生长细胞,直接收集细胞。用0.5-1 mL冰冷PBS重悬细 胞(5-10万)。 2)采用 480-535 nm 波长激发,测定 590 nm-610 nm 以 上的发射,细胞应可分成两个亚群:ROS 阴性细胞仅有很低的荧光强度,ROS阳性细胞有较强的红色荧光。
有效期 6个月
注意事项 1.DHE在光照和空气中易被氧化,注意避光保存。 2.该试剂可用于体外培养活细胞、培养或灌流组织及组织 冰冻切片的检测。 3. 对不同的细胞和组织,应选择合适的孵育时间和浓度,以观察 ROS 的变化。
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DHE(Dihydroethidium),可自由透过活细胞膜进入细胞 内,并被细胞内的 ROS 氧化,形成氧化乙锭;氧化乙锭可 掺入染色体 DNA 中,产生红色荧光。根据活细胞中红色荧 光的产生,可以判断细胞 ROS 含量的多少和变化。DHE 在 细胞内主要被超氧阴离子型 ROS 氧化,用流式细胞仪或荧 光显微镜可直接观察,是一种快速简便的组织或培养活细胞中ROS 经典检测方法。
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