原理介绍：

蛋白质免疫印迹（Western Blot，WB）是一种基于抗原-抗体特异性识别原理，检测生物样本中目标蛋白质的常用技术。该方法首先通过SDS-PAGE凝胶电泳按分子量大小分离蛋白质，随后将分离的蛋白转印至PVDF膜等固相载体上。利用特异性一抗与目标蛋白结合，再通过HRP标记的二抗与一抗结合，最后借助ECL化学发光底物进行显影分析。该技术广泛应用于特定蛋白的鉴定、表达水平的定性与半定量检测，并可用于研究蛋白质与蛋白质、DNA或RNA之间的相互作用。

实验流程：

　　蛋白提取-制胶-电泳-转膜-封闭-一抗孵育-二抗孵育-化学发光-结果分析;

样本送样及运输要求：

贴壁细胞标本收集（无RIPA裂解液）：

     1、用胰酶消化细胞，使细胞分散开。
     2、3000rpm离心，收集细胞沉淀，PBS清洗1-2次，吸干净残余PBS，干冰运输。
悬浮细胞标本收集：
    1、3000rpm离心10min，弃上清，PBS清洗1-2次，收集细胞沉淀，吸干净残余PBS，干冰运输。

组织样本：

    1、组织样本，离体后尽快冻存。
    2、有条件的话，最好先将样本在液氮中速冻，再转入-80℃冰箱中保存。
    3、对于心肝脾肾等组织可每50~100mg加1ml裂解液，肺100~200mg加1mg裂解液。加入裂解液前，尽量将组织剪成小块。
    4、少量指标，组织需要提供的样本量要求50mg或更多；